Антитела к коронавирусу — расшифровка

Как использовать?

Инструкция:

1. Полоски достаточно просто окунуть в аквариумную воду на определенное время, которое написано на упаковке. Затем сравнить цвет полоски и цветовой шкалой, которая шла в комплекте.
2. Капельный тест:
   • рН – набрать в пробирку 5 мл аквариумной воды и добавить 5 капель тест-жидкости, встряхнуть и сравнить цвет воды в пробирке со шкалой;
   • КН – набрать в пробирку 5 мл аквариумной воды и добавлять по 1 капле тест-жидкости, каждый раз встряхивая пробирку, как только цвет воды в пробирке поменяется – перестать добавлять тест, количество добавленных капель равняется уровню карбонатной жесткости. 1 капля = 1°КН;
   • GH – так же, как и КН;
   • остальные капельные тесты являются двухкомпонентными и подразумевают добавление 2-х реагентов, каждый производитель предлагает свою методику тестирования, с которой можно ознакомиться в инструкции.
3. Электронные. Набрать в небольшую емкость немного аквариумной воды и поместить туда прибор. Включить его. Минимум раз в неделю электронный рН-метр нуждается в калибровке специальными растворами. Лучше калибровать по двум точкам.
4. Длительный тест СО2. Залить в дропчекер индикаторную жидкость и прикрепить в аквариум с помощью присоски.

   Дропчекер необходим только в том случае, если в аквариум подается углекислый газ. В случае альтернативных методов внесения углерода (жидкий, таблетированый) – он не эффективен.

   Цвет, который примет жидкость, говорит о содержании газа в воде:

   • желтый – избыточное количество;
   • зеленый – оптимальное;
   • синий – недостаток СО2.

Принцип работы дропчекера, его описание и использование — в видео:

Tetra WaterTest Set

Комплект тестов, помогающих быстро и легко определить важнейшие параметры воды в аквариуме.

• для определения важнейших параметров воды в аквариуме: pH, карбонатной и общей жесткости GH и KH, содержания нитритов
• надежные и точные результаты анализов
• после снятия показателей pH и общей жесткости KH можно с помощью CO2-таблицы определить количество CO2 в воде
• вместе с реактивами содержатся колбочки, шприц и цветовые таблицы для определения результатов тестов информации об аквариумной воде, инструкции на русском языке
• имеются сменные заправки для наиболее простых и часто совершаемых тестов идеален для новичков или как подарок

Основные виды тестов

При выборе подходящего индикатора для воды необходимо учитывать размеры емкости и разновидность водных обитателей. Тесты могут быть различного типа, каждый из которых имеет особенности и преимущества.

Полоски

Полоски доступный вид тестов. Полоски необходимо погрузить в жидкость до отмеченного уровня. Получить необходимую информацию можно сравнив цвет на полоске со шкалой допустимых показателей. Преимуществом такого метода выступает доступная стоимость. Приобрести индикаторы можно в зоологическом магазине. Однако для получения точной информации, необходимо проводить исследования повторно.

Тест-полоски – наиболее простой и быстрый способ проверки качества воды

Капельные

Капельный метод анализа воды популярный, так как позволяет получить точные результаты. Капельные тесты часто используются для аквариума. Для проведения процедуры, необходимо жидкость смешать с реактивом и сравнить с допустимыми значениями. Преимуществом такого метода является точный результат и доступность наборов в специализированном отделе. В отличие от тест-полосок, капельный метод имеет высокую стоимость, однако позволяет своевременно устранить токсины и защитить обитателей аквариума от серьезных заболеваний.

Капельные тесты показывают наиболее правильный результат

Электронные

Электронный тестер стоит дорого, однако используется для емкостей с пресной или солёной водой. Используя прибор можно получить точную информацию за короткое время. Электронные тестеры делятся на несколько видов:

• рН-метр – применяется для общего изучения качества воды. Использовать такой прибор очень легко, достаточно установить необходимые параметры и опускать рН-метр в жидкость;
• TDS-метр – устройство применяется, когда необходимо получить более детальный анализ воды. Позволяет выявить количество солей в жидкости, однако требует регулярной калибровки.

С помощью электронных индикаторов можно получить сведения за короткий период. Однако для того, чтобы устройство показывало точную информацию, необходимо использовать специальные калибровочные растворы, которые сложно найти в продаже.

К электронным тестам можно отнести рН-метр и TDS-метр

Другие виды

Также могут использоваться беспрерывные тесты. С помощью таких методов можно выявить количество углекислого газа в воде, или другого токсического вещества. Для проведения анализа используя специальный раствор, который помещается в дропчекер, и при контакте с водой окрашивается в определённый цвет.

Постоянный тестер имеет много преимуществ, в первую очередь это регулярный контроль за водой. Также раствора хватает на длительный период, что позволяет экономить финансовые средства. Однако необходимо учитывать, что информация проявляется с задержкой и выявляет не все элементы.

Есть еще тесты, которые работают непрерывно

Основные виды

В продаже можно найти тесты разных типов, каждый из которых имеет свои сильные и слабые стороны.

Полоски

Представляют собой лакмусовую бумагу, которая при контакте с водой меняет цвет в зависимости от наличия и количества тех или иных веществ.

Достоинства:

1. Простота использования. Достаточно погрузить в аквариум такую полоску на несколько секунд и можно сразу же увидеть результат.

2. Есть полоски-мультитесты. С помощью одной такой тест-полоски можно узнать сразу несколько важных параметров.
3. Есть автоматизированные полоски. Некоторые производители таких тестов разрабатывают приложения на смартфоны, с помощью которых можно навести камеру на использованную полоску, и она покажет результат.

Недостатки:

1. Низкая точность. Полоски позволяют лишь приблизительно узнать интересующие параметры.
2. Некоторые параметры определить такими тестами невозможно.
3. Короткий срок годности.

Капельные

Самые популярные и одни из самых точных тестов.

Достоинства:

• высокая точность;
• практически на все важные параметры есть тесты;
• возможность купить целую минилабораторию.

Недостатки:

• проведение тестов занимает достаточно много времени;
• некоторые производители предлагают продукты низкого качества;
• высокая стоимость хороших тестов;
• чаще всего большой шаг в тестах на нитрат/фосфат.

Электронные

К электронным тестам можно отнести рН-метр и TDS-метр. Они активно используются аквариумистами.

Достоинства:

1. Не занимает много времени.
2. Не имеет сроков годности.
3. Не заканчивается.
4. Высокая точность результатов.

Недостатки:

1. Необходимы специальные условия хранения.
2. Требуют регулярных калибровок.
3. Калибровочные растворы достаточно трудно найти в продаже.
4. TDS-метр применим только на этапе водоподготовки, как тест аквариумной воды – он бесполезен.
5. Высокая стоимость.

Другие

Есть еще тесты, которые работают непрерывно. Это тесты на определение содержания в воде углекислого газа. Тест представляет стеклянную колбочку (дропчекер), в которую заливается специальная жидкость. В зависимости от цвета, которого примет жидкость, можно судить о концентрации СО2.

Достоинство длительного теста заключается в том, что он показывает результат постоянно, недостаток – то, что он показывает – это результат двух-трех часовой давности, то есть тест работает с небольшой задержкой во времени.

Что это такое, зачем проводят?

Тесты позволяют узнать важнейшие параметры аквариумной воды, от которых зависит жизнь гидробионтов и здоровый рост растений. Также тесты позволяют определить наличие в воде ядовитого хлора, аммиака, аммония и нитритов, которые нередко являются причиной гибели рыб и креветок.

В продаже можно найти тесты на:

1. Кислотность (рН).
2. Карбонатную жесткость (КН).
3. Общую жесткость (GH).
4. Нитраты (NO3).
5. Фосфаты (PO4).
6. Нитриты (NO2).
7. Аммиак/аммоний (NH4/NH3).
8. Кислород (O2).
9. Углекислый газ (CO2).
10. Медь (Cu).
11. Железо (Fe).
12. Силикаты (Si).
13. Хлор (Cl).
14. Кальций (Ca).
15. Магний (Mg).

Совсем необязательно иметь полный набор всех тестов, каждый из них полезен в конкретных ситуациях. Тесты проводят чтобы убедиться, что с водой в аквариуме все в порядке, рассчитать дозу вносимых удобрений, выявить причину проблем.

Как грамотно выбрать нужный?

В продаже можно найти продукты разной ценовой категории. Но не стоит доверять самым дешевым тестам, у них есть один большой недостаток – очень размытая шкала.

Например, тест на нитрат может показать только 4 варианта – 0мг/л, 30 мг/л, 50 мг/л и 100 мг/л. Но такой точности недостаточно. Поэтому при покупке можно попросить коробку и посмотреть, какой шаг предусматривает данный тест. Чем он меньше – тем лучше.

Также некоторые тесты имеют еще один недостаток – часто случается так, что при необходимости сравнить цвет тестированной воды с цветовой шкалой, этого сделать не получается. Такого цвета на шкале попросту нет.

Лучше доверять проверенным производителям, которые давно зарекомендовали себя на рынке — Tetra, JBL, Sera.

Tetra Water Test Set

Небольшая лаборатория для анализа аквариумной воды, содержит в себе тесты на КН, рН, GH, NO2 и CO2. Тесты отличаются точностью и удобностью.

В комплект входят:

• шприц и кюветка,
• реактивы,
• пробирки и инструкция на русском языке.

Также в наборе можно найти таблицу оптимальных параметров воды и рекомендации о том, что делать, если результаты теста были неудовлетворительными. Стоимость около 3400 руб.

Sera Quick test

Один из лучших тестов-полосок, позволяющий быстро определить важнейшие параметры:

• общую жесткость,
• карбонатную жесткость,
• кислотность,
• нитраты и нитриты.

Для проведения теста аквариумисту необходимо просто поместить полоску в аквариум на 1 минуту, а затем сравнить полученный результат с цветовой шкалой. В комплект входит 20 полосок, цветовая шкала. Стоимость — 900 руб.

JBL ProAquaTest

Профессиональная лаборатория для тестирования. Позволяет измерить капельным методом следующие параметры: pH, KH, CO2, NO3, PO4, Si, K, Mg, Fe.

В комплект входят:

• 22 реагента,
• 2 шприца,
• 2 пробирки,
• блокнот для записей результата,
• инструкция,
• ручка,
• термометр,
• мерные ложки.

Тесты JBL признаны аквариумистами самыми точными, несмотря на столь внушительную стоимость, они остаются популярными. Этот набор будет особенно полезен любителям растительного аквариума.

Стоимость — 9000 руб.

Когда нужны, а когда нет?

По-хорошему, базовый набор тестов нужен всегда, так как проблемы имеют свойство появляться внезапно.

Базовым набором считаются тесты на КН, рН, GH, РО4, NO3. Остальные тесты можно приобрести по необходимости.

Правильный запуск аквариума – это запуск с помощью тестов, специалисты никогда не выпускают рыбу без проверки воды на наличие ядовитых веществ

Особенно это важно, когда рыба капризная и дорогостоящая

Успешно содержать растительный (голландский) аквариум без тестов на нитраты/фосфаты очень тяжело, ведь обнуление одного из этих параметров и слишком сильное отклонение от нормы за несколько недель превратит красивый подводный сад в болото с цветущей водой.

Виды антител

С началом пандемии COVID-19 многие наслышаны об иммуноглобулинах G (IgG) и M (IgM), но есть и другие виды антител. Всего существует 5 типов иммуноглобулинов:

• IgM – образуются в первые дни после инфицирования. Это антитела острой фазы². Они слабее, чем иммуноглобулины G, и быстрее распадаются. Наличие IgM свидетельствует о недавно перенесенном заболевании.
• IgG – являются частью вторичного иммунного ответа. Это антитела, которые продуцируются уже после инфекции. Они нужны на случай, если микроб вдруг еще раз «нагрянет».
• IgA – основной класс антител слизистых тканей. Это один из элементов местного иммунитета – защитных реакций на слизистых носовой, ротовой полости и горла (если речь о респираторных патогенах, таких как SARS-CoV-2)³.
• IgE – ответственны за защиту организма от паразитов. Также принимают участие в аллергических реакциях.
• IgD – наименее изученный класс иммуноглобулинов. Установлено, что IgD является мембранным рецептором. Возможно, эти антитела связываются с некоторыми белками крови, из-за чего развивается аутоиммунное заболевание.

Рисунок 2. Упрощенная схема иммунного ответа. Изображение: сайт Клуба русскоязычных ученых штата Массачусетс

Сегодня для определения антител против нового коронавируса чаще всего применяют иммуноферментный или иммунохроматографический анализы (ИФА и ИХА).

Метод ИФА считается более точным, поскольку это не только качественный, но и количественный анализ (показывает количество антител в единице объема крови). Для этого человеку нужно сдать кровь в медицинском учреждении или диагностической лаборатории.

ИХА-тестирование – это анализ по тест-полоскам. Он показывает лишь наличие или отсутствие иммуноглобулинов М и G.

Требования по забору крови для ИФА- и ИХА-метода стандартные (как и для других анализов крови):

• кровь желательно сдавать натощак;
• перед анализом не рекомендуют пить кофе, соки, чай и алкоголь;
• за час до анализа желательно также исключить воду;
• курильщика не рекомендуется курить, хотя бы за 1-2 часа до тестирования.

Расшифровка теста IgM/IgG

Поскольку наиболее информативными при респираторных вирусных инфекциях являются иммуноглобулины М и G, то чаще всего акцент делается именно на эти антитела. Тест IgM/IgG проводится методом ИХА. Это качественный анализ, который показывает статус иммуноглобулинов M и G в крови.

В таблице 1 мы приводит результаты расшифровки такого теста. Знаками «+» и «-» обозначается наличие или отсутствие иммуноглобулина при тестировании.

Таблица 1. Расшифровка теста IgM/IgG

Ig-статус	IgM (+)	IgM (-)
IgG (-)	С момента заражения прошло не более 3-х недель. Инфекция, скорее всего, находится в острой фазеБывают и ложноположительные результаты. В таких случаях рекомендуют сделать и ПЦР-анализ для выявления патогена	Контакта с новым коронавирусом не было. Отсутствие антител класса М и G также может означать, что с момента инфицирования прошло не более 7-ми дней. При наличии подозрительных симптомов рекомендуется провести ПЦР-анализ
IgG (+)	Наличие обоих типов антител указывает на то, что с момента заражения прошло от 3-х до 10-ти недель. Еще не все IgМ исчезли, но уже образуются IgG	Организм давно контактировал с вирусом. Возможно, вы переболели или были бессимптомным носителем

Из всех 4-х вариантов только один (IgG (-),IgM (-)) указывает на возможное отсутствие контакта с вирусом SARS-CoV-2. Однако причины у такого результата могут быть и другие:

• Пренебрежение правилами подготовки к анализу. Методики ИФА и ИХА отличаются высокой чувствительностью. Несоблюдение правил подготовки к такому анализу может исказить результат.
• Отсутствие антител после болезни. В ряде случаев, когда ковид проходит в легкой форме, антитела могут не обнаруживаться.
• Антитела к интерферону. Примерно у 10% людей с тяжелой формой COVID-19 вырабатываются антитела к интерферону. Последний представляет собой систему противовирусных белков, которые вырабатываются при инфицировании. Так вирусу SARS-CoV-2 удается обезоружить иммунную систему пациента, лишив ее интерфероновой защиты. При таких обстоятельствах иммуноглобулины к вирусным антигенам быстро исчезают.

Наконец, если у вас характерные для коронавирусной болезни симптомы, то это не всегда COVID-19. Грипп и простудные заболевания никуда не исчезли, и люди продолжают ими болеть.

Tetra WaterTest Set Plus

Лаборатория в удобном чемоданчике

• определение важных показателей: pH (для пресной воды), карбонатной и общей жесткости GH + KH, содержания нитритов и нитратов, содержание кислорода, аммиака, фосфатов, железа и кислорода.
• надежные и точные результаты анализов
• чемоданчик, в котором кроме колбочек, шприца и информации об аквариумной воде, содержатся инструкции на русском языке, цветовые таблицы определения результатов тестов
• после снятия показателей pH и общей жесткости KH можно с помощью CO2-таблицы определить количество CO2 в воде
• имеются сменные заправки для наиболее простых и часто совершаемых тестов

Tetra Test 6 in 1

Благодаря тесту «Tetra Test 6 in1» можно быстро проверить качество аквариумной воды, обеспечить наилучшие условия и избежать многих проблем. Быстрая и простая проверка качества воды Индикаторный тест для проверки 6 показателей качества воды

Позволяет измерить водородный показатель (pH), карбонатную жесткость (KH), общую жесткость (GH), содержание нитритов (NO2), нитратов (NO3) и хлора (Cl2)

• pH – уровень pH характеризует кислотность или щелочность воды, что является важным параметром для здоровья рыб. В идеале уровень pH должен находиться между 6,5 и 8,5
• KH – гидрокарбонатная или временная жесткость воды обеспечивает стабилизацию уровня pH. Как правило, рекомендуется значение от 3° до 10 °dH
• GH – общая жесткость оказывает непосредственное влияние на здоровье рыб, растений и микроорганизмов. В идеале ее значение должно находится в диапазоне между 6 и 16 °dGH
• NO2 – близкий к нулю уровень нитритов показывает, что фильтр работает должным образом и что вода безопасна для рыб
• NO3 – содержание нитратов указывает на степень «свежести» воды и на то, насколько вероятно развитие водорослей
• Cl2 – отображает содержание хлора в воде. Чрезмерно высокий уровень вредит полезным бактериям и рыбе

То что реально может спасти рыбьи жизни (много фото в работе тестера, сравнение на двух аквариумах)

Совсем недавно я рассказывала о моем уходе за рыбками гуппи, и сегодня решила более подробно показать процесс работы тестера Tetra Test 6 in 1.

Что он из себя представляет?

Упаковка. Картонная коробка, в которую вложена туба с тестерами (25 штук) + инструкция на разных языках, в том числе на русском. В инструкции очень подробно представлено значение, описание и расшифровка результатов, а также практические рекомендации по коррекции качества воды в аквариуме. Например

Как работает. При необходимости (а может из любопытства достаете из тубы тест-полоску,

Покажу в процессе на своих двух аквариумах. По полоскам сразу очевидна разница в качестве воды.

Первый тест проводился в детском аквасе с подрощенными мальками,

Второй тест проводила в основном аквасе. Так как там взрослые рыбы, их больше и естественной «грязи» они производят значительно больше и чаще,

По итогам теста я сделала частичную подмену воды в основном аквариуме по следующему алгоритму: чистка дна сифоном, поскребла стенки аквариума, добавила отстоянной воды с добавлением Aqua Safe.

Рыбки довольны и счастливы

А здесь привожу фотографии инструкции и информацию о производителе.

Надеюсь мой отзыв поможет кому-либо сориентироваться в этом тестере и решить для себя — нужен он вам или нет.

Аквариум это небольшая экосистема, подчиняющаяся тем же законам, что и другие экосистемы в природе. Но из-за очень малого размера и относительно высокой плотности заселения гидробионтами, со временем определенные биохимические процессы могут очень быстро выйти из-под контроля, тем самым нарушив биологическое равновесие в аквариуме

Именно поэтому так важно не только следить за своевременным питанием и температурным режимом, но и за составом воды в нем

Как понять, какие наборы необходимы?

Для каждой ситуации или проблемы необходим свой набор тестов:

Тест
Зачем
При запуске аквариума
КН
Позволяет узнать, подходит ли качество водопроводной воды аквариумным растениям и рыбкам, которых хочется завести.
NH3/NH4 и NO2
Определяет созревание азотного цикла. Заселять аквариум можно только тогда, когда значения этих параметров достигнут нуля.
Создание растительного аквариума
NO3, PO4
От этих параметров следует отталкиваться при внесении удобрений. Оптимальные показатели NO3 – 15 мг/л, PO4 – 1 мг/л

Избыток или недостаток одного из этих параметров провоцирует появление нежелательных водорослей.
CO2
Контроль содержания углекислого газа очень важен, так как стоит задача дать углекислотную подкормку растениям и при этом не навредить рыбам.
KH
Установить необходимый уровень карбонатной жесткости без теста на КН – очень затруднительно.
pH
Зная рН и КН, можно определить уровень содержания СО2.
Массовый падеж рыбы по неизвестным причинам
NH3/NH4 NO2 Cl
Важно определить наличие ядов в аквариумной воде: либо это скачек азотистых соединений, либо пагубное воздействие хлора. От наличия тех или иных веществ зависят дальнейшие действия.
Появление водорослевых обрастаний
PO4 NO3
Понять какого элемента слишком много, а какого не хватает

С помощью подмен и монорастворов выровнять эти параметры до оптимальных показателей.
Содержание морского аквариума
Ca Mg
Определить солевой состав воды после подготовки, и в случае необходимости – подкорректировать его.
Si
Убедиться в отсутствии силикатов.
Содержание декоративных креветок
GH
Для правильной реминерализации воды.

Что такое антитела

Антитела (или иммуноглобулины) – это белки, которые помогают организму бороться с бактериями, грибками и вирусами. Почти для каждого возбудителя, с которым встречался организм, имеются антитела. Иммуноглобулины распознают поверхностные белки микроба и связываются с ним. Далее антитела либо нейтрализуют «чужака», либо привлекают к нему другие элементы иммунитета. Например, систему комплемента (комплекс белков, защищающих от чужеродных агентов) или фагоциты – иммунные клетки, которые пожирают микробов.

Как правило, антитела образуются уже на первой неделе заболевания коронавирусной инфекцией. При повторном попадании вируса в кровь они его сразу замечают и нейтрализуют. Но антитела – не единственная и не главная составляющая противовирусной защиты.

Гуморальный и клеточный иммунитет

Различают два вида иммунитета – гуморальный и клеточный. Гуморальный иммунитет представлен антителами и системой комплемента (комплекс белков, разрушающих патогены), которые находятся в плазме крови.

Клеточный иммунитет представлен Т-лимфоцитами, натуральными киллерами и макрофагами¹. Эти клетки иммунной системы, которые распознают и уничтожают инфицированные клетки человека.

Вырабатывают антитела В-лимфоциты после активации Т-хелперами. То есть, чтобы получить достаточное количество антител, должны работать и В-клетки, и Т-клетки. Т-хелперы активируют не только В-лимфоциты для производства антител, но и Т-киллеры – клетки специфического цитотоксического звена. Они, как и Т-хелперы, узнают клетки, зараженные именно данным вирусом, и убивают их. Таким образом гуморальная и клеточная часть иммунитета тесно связаны. Без хелперов не будет ни антител, ни специфического клеточного цитотоксического ответа. 

Гуморальный иммунитет (в частности, антитела) больше работает против внеклеточных патогенов (например, бактерий, грибков). В отношении вирусной инфекции куда важнее клеточный иммунитет, поскольку вирус – это внутриклеточный паразит

Здесь важно уничтожить инфицированные клетки (например, клетки слизистых дыхательных путей, куда проникает вирус). Циркулирующие в крови антитела из-за больших размеров физически не способны проникнуть в слизистые оболочки (кроме иммуноглобулина А)

Поэтому обезвреживание вируса на этом этапе – прерогатива клеточного иммунитета.

Как правило, механизмы клеточного иммунитета работают намного дольше гуморальных. В отношении нового коронавируса, возможно, речь идет о годах или даже десятилетиях (пока нет данных на этот счет). Сами антитела могут исчезнуть уже через несколько месяцев,  но останутся клетки памяти, причем как Т-лимфоциты, так и В-лимфоциты, которые при столкновении с вирусом обеспечат и гуморальный, и клеточный ответ.

Для чего определяют антитела?

Важно знать, как интерпретировать результаты анализа на антитела к новому коронавирусу, чтобы они были для вас информативны. Наличие тех или иных антител говорит о том, что вы были вакцинированы или встречались с вирусом (недавно или несколько месяцев назад), причем не важно, вы переболели, или это было бессимптомное носительство, которое сложно иначе подтвердить

Одна из причин, по которой определяют именно антитела – дешевизна и доступность метода. Антитела, как лампочка на холодильнике, показывают, работает ли механизм, произошла ли активация иммунитета. Разделение гуморального и клеточного иммунитета довольно условно, ведь эти два звена связаны. Анализ на клеточный иммунитет – дорогостоящая процедура, которая мало где доступна, a наличие антител говорит о том, что, скорее всего, присутствует и клеточный ответ. А вот при их отсутствии позитивность клеточного иммунитета под вопросом. 

Рисунок 1. Коллективный иммунитет. Изображение: Фото: NIAID / Flickr

Диагностика вирусов и бактерий картофеля методом ИФА

Иммуноферментный анализ (ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) – лабораторный метод качественного и количественного определения разнообразных молекул, вирусов, бактерий и т.п. В основе метода лежит высокоспецифичная иммунологическая реакция антитела и антигена.

Антителами являются сложные белковые молекулы (иммуноглобулины), синтезируемые клетками иммунной системы человека и прочих теплокровных животных в ответ на проникновение в организм антигенов – вирусов, бактерий, молекул и прочих чужеродных объектов. Высокая специфичность взаимодействия между антителом и антигеном обусловлена тем, что активный центр антитела способен связываться с уникальным фрагментом антигена.  Именно это свойство реакции антитело-антиген определяет специфичность, надёжность, достоверность и чувствительность ИФА при проведении диагностики патогенов картофеля. При наличии целевого патогена в исследуемом образце формируется комплекс соответствующих антител и антигена, детекцию которого определяют по активности фермента, связанного с антителами.

Существует широкое разнообразие методов  проведения ИФА, различающихся природой антигена, принципом связывания, условиями проведения, способами детекции результатов ферментативной реакции и т.п. Для диагностики патогенов сельскохозяйственных культур традиционно используется “сэндвич”-метод с использованием двух типов антител (DAS-ELISA – double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay). В качестве фермента, обычно, используется щелочная фосфатаза.

Проведение иммуноферментного анализа

Реакция проводится в 96-луночных полистирольных микропланшетах, характеризующихся высокой эффективностью связывания белковых молекул, в т.ч. иммуноглобулинов (антител), на своей поверхности.

На первом этапе антитела захвата (capture antobodies) разводят в необходимой концентрации в покровном буфере (coating buffer), вносят в лунки микропланшетов и инкубируют от нескольких часов при температуре +30-37°С до нескольких дней при температуре +4°С. Во время инкубирования антитела неспецифически адсорбируются на поверхности лунок микропланшета. По окончании инкубирования планшеты промывают несколько раз промывочным буфером (wash buffer) для удаления антител захвата, которые не связались с поверхностью микропланшета.

Сорбция антител захвата на поверхности лунки микропланшета

На следующем этапе в лунки микропланшета, поверхность которых покрыта антителами захвата, вносят сок, экстракт, или гомогенат растений, исследуемых на наличие антигенов – патогенных бактерий или вирусов и инкубируют 14-16 часов  при температуре +4°С. При необходимости, растительный материал можно развести экстракционным буфером (extraction buffer). По окончании инкубирования лунки несколько раз промывают промывочным буфером.

При наличии целевого патогена в образце происходит взаимодействие специфичного фрагмента антигена с соответствующим антигенсвязывающим центром антител захвата.

Связывание антигена с антителами захвата

В промытые лунки наносят антитела детекции, конъюгированные с ферментом щелочная фосфатаза (Ф). Антитела разводят в необходимой концентрации в конъюгатном буфере (conugation buffer). Микропланшеты инкубируют при температуре +30°С в течение 5 часов. По окончании инкубирования микропланшеты несколько раз промывают промывочным буфером для удаления антител детекции, не связавшихся с антигенами.

На данном этапе происходит взаимодействие специфичного фрагмента антигена с соответствующим антиегнсвязывающим центром антител детекции. Антигенсвязывающие центры антител захвата и антител детекции различны и специфично связываются с разными фрагментами антигена.

Связывание антител детекции с антигеном

На заключительном этапе в лунки добавляют пара-нитрофенилфосфат, являющийся субстратом для фермента щелочная фосфатаза. При наличии в растительном образце целевых патогенов формируется комплекс антитело захвата-антиген (вирус или бактерия)-антитело детекции, конъюгированное с ферментом щелочная фосфатаза. Фермент (Ф) катализирует превращение бесцветного пара-нитрофенилфосфата (субстрат, С) в жёлтый пара-нитрофенол (продукт, П), в результате чего происходит окрашивание реакционной смеси в жёлтый цвет. Интенсивность окраски  реакционной смеси можно оценивать как визуально, так и с помощью спектрофотометра.

Фермент, конъюгированный с антителами детекции, катализирует реакцию превращения бесцветного субстрата в жёлтый продукт

Заключение

Антитела – одна из составляющих гуморального иммунитета. Это иммуноглобулины плазмы крови, которые нейтрализуют антигены или привлекают для этого другие специализированные клетки иммунитета. В случае с коронавирусной болезнью в диагностических целях определяют иммуноглобулины М, G и А. Наличие IgМ и IgА говорит об острой фазе заболевания или периоде выздоровления. IgG появляются позже, поэтому их наличие указывает на то, что человек встречался с вирусом SARS-CoV-2.

У теста на антитела имеются и свои недостатки, среди которых:

• Неоднозначность результатов. Отсутствие антител вовсе не означает отсутствие болезни в анамнезе. Иммуноглобулины со временем исчезают. При этом сохраняется клеточный иммунитет, который продолжает защищать переболевшего или вакцинированного человека. Однако, если через месяц после болезни или инфекции антител нет, то наличие клеточного ответа маловероятно. То есть нет прямой и точно известной корреляции между титром антител и степенью активации цитотоксического клеточного звена, но есть зависимость по типу да-нет.
• Погрешности. Точность такого тестирования оставляет желать лучшего. Малое количество антител достоверно определяется с трудом.

Помните, что и при наличии антител нет 100%-й гарантии избежать заражения. Поэтому продолжайте носить маски, соблюдайте дистанцию и другие профилактические рекомендации.